Fotodegradación de derivados indolicos sensibilizada por flavinas en sistemas compartimentalizados.

Abstract

Esta tesis tiene como objetivo principal estudiar el efecto de la compartimentalización en la interacción fotoinducida entre compuestos indólicos y flavínicos con especial interés en la generación de fotoproductos citotóxicos. Para realizar este estudio se utilizan derivados indólicos y flavínicos más hidrofóbicos que el Trp y la RF, tales como Tryp, NATE, NATA, Indol-3-acetamida y LF y TPRF respectivamente, con el fin de aumentar la incorporación a los distintos sistemas compartimentalizados estudiados. El carácter hidrofóbico se cuantificó según la partición entre octanoll buffer fosfato pH 7. Se estudia la incorporación y la reacción de fotodegradación de índoles sensibilizada por flavinas en micelas aniónicas, catiónicas y neutras y en vesículas unilaminares de DPPC (SUV's) como modelos celulares simplificados. Las micelas neutras y SUV's, son los medios compartimentalizados que hacen aumentar la eficiencia en la generación de fotoproductos, especialmente cuando el fotosensibilizador es TPRF y los derivados indólicos NATE y NATA, lo que correlaciona con el aumento en la incorporación que presentan estos compuestos respecto al Trp y la RF. En las micelas aniónicas y catiónicas, la generación de fotoproductos disminuye respecto al medio homogéneo, debido a un efecto electrostático que desfavorece la interacción entre las especies intermedias cargadas, necesarias para la formación de fotoproductos del tipo indol-flavina. Se aislan lipoproteínas (VLDL, LDL, HDL, proteínas pesadas) desde el plasma humano por ultracentrifugación en gradiente de densidad post incubación con cada uno de los compuestos. Los resultados muestran que todos los derivados se asocian preferentemente a la fracción de proteínas pesadas compuesta por albúminas y globulinas, y que NATA y NATE se asocian también a I-IDL, pero no se observa asociación a LDL. Cuando los compuestos flavínicos son incorporados en SUV's previo a la incubación, aumenta la asociación a LDL. Finalmente, se estudia la fotosensibilización en bacterias del tipo Staphylococcus aureus. Se determina la incorporación de los derivados flavínicos a las células bacterianas, la que aumenta a medida que aumenta el carácter hidrofóbico del compuesto (TPaIRF>TButRF> TPRF>RF). Cuando el sistema es irradiado el crecimiento bacteriano es inhibido pero con eficiencia menor de la esperada, sin embargo, la irradiación en presencia de TPaIRF no causó ningún efecto. Los sistemas indol-flavina que utilizan TPRF como fotosensibilizador y los derivados indólicos NATE y NATA, serían los más adecuados para ser utilizado en terapia debido a la alta generación de fotoproductos de naturaleza indol-flavina.