La activación del receptor b1 de cininas induce la secreción de los factores angiógénicos il-4 y vegf en queratinocitos humanos

Abstract

Durante la respuesta inflamatoria los queratinocitos expresan un número amplio de citoquinas, quimioquinas y factores de crecimiento que modulan directa o indirectamente procesos como quimiotaxis, ·migración, proliferación y angiogénesis. Además, está ampliamente documentado que enfermedades de la piel como psoriasis, dermatitis atópica y cáncer se caracterizan por una angiogénesis exacerbada. Sin embargo, no se ha evaluado si en estas patologías los queratinocitos, activados por mediadores inflamatorios como las cininas, pueden liberar factores pro-angiogénicos. La hipótesis de mi tesis fue que la estimulación de queratinocitos humanos con el agonista del receptor B1 de cininas (RB1) induce la secreción de IL-4 y VEGF, para favorecer la angiogénesis. En estas células se demostró que laestimulación del RB1 induce tanto la expresión como la liberación de IL-4 y VEGF, un efecto que fue específico y corroborado utilizando un antagonista del RB1. Se determinó, mediante inhibidores farmacológicos, que en la expresión de IL-4 participarían las vías MAPK-JNK,PI3K/Akt y PKC a través de mecanismos independientes de Caz+ ya que el agonista B1 no provocó aumento de Caz+ intracelular. La activación del RB1 también provocó la fosforilación transitoria de MAPK-JNK, efecto que fue bloqueado por un antagonista B1 y por un inhibidor específico para JNK. Además, se determinó. que la activación del RB1 producía la translocación nuclear de JunB, factor de transcripción que puede unirse a la región del promotor del gen de IL-4 regulando así su expresión. El pre-tratamiento de las células con elantagonista del RB1 o con el inhibidor de la vía MAPK-JNK disminuyó esta translocación, demostrando la contribución de esta vía en la activación de JunB. Por otra parte, se evaluó laangiogénesis utilizando un cultivo 3D de esferoides de células endoteliales embebidos en matrices de colágeno tipo l. La cuantificación del área acumulada de yemas y tubos generados después de la estimulación con el agonista B1 e IL-4, mostró que ambos estímulos inducenangiogénesis. La liberación de metaloproteasas de matriz (MMPs), la migración y proliferación de las células endoteliales, constituyen eventos cruciales de este proceso, razón por la cual se evaluó el efecto de LDBK e IL-4 en estas etapas. Las células endoteliales estimuladas con diferentes concentraciones de IL-4 recombinante humana y LDBK no mostraron un aumentosignificativo de la proliferación, pero sí produjeron una movilidad significativa de las células endoteliales y un aumento de la liberación de MMPs 2 y 9. Por lo tanto, se puede concluir que en el microambiente inflamatorio en que son generadas las cininas, estas estimularían en los queratinocitos, la liberación de factores pro-angiogénicos como VEGF e IL-4 que además estarían involucrados en la liberación de MMPs y la migración de las células endoteliales. Mis resultados son originales por cuanto amplían el conocimiento sobre las cininas e IL-4, dos nuevos factores angiogénicos con posible valor terapéutico en enfermedades inflamatorias de la piel.